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正確規(guī)范的細胞凍存的方法
更新時間:2015-06-16 點擊次數(shù):1512

目前,細胞凍存zui常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細胞。細胞在不加任何保護劑的情況下直接冷凍,細胞內(nèi)外的水分會很快形成冰晶,從而引起一系列不良反應(yīng)。
正確細胞凍存的方法:
1.細胞:選對數(shù)生長期細胞,收集細胞24小時前換液一次。
2.計數(shù):按常規(guī)方法把細胞制成細胞懸液,計數(shù),令細胞密度達5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。
3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。
4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細胞懸液。
5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細檢查,定要封嚴,必要時可浸入藍色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細胞名稱,凍存日期,以便日后查找。
 

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