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技術文章

Technical articles

2023
6-5

ELISA技術綜述（五）
其他內容：酶聯免疫測定技術的多酶級聯放大系統：一、AP底物放大系統substrateampiificationsystemAP可催化底物NADP+脫磷酸而生成NAD+(輔酶1)，以乙醇作還原劑，在醇脫氧酶催比下，乙醇脫氫，NAD+還原為NADH，NADH在黃遞酶的催化下脫氫，同時四唑鹽(tetrazoliim)被還原成有色的甲蠟(formazan)。AP不斷催化NAD+生成，NAD+與NADH循環轉化，不斷生成甲蠟。整個反應周期由AP及醇脫氫酶、黃遞酶組成酶級聯，每個AP分子...
2023
5-29

ELISA技術綜述（四）
2.4結合物的保存酶標抗體中的酶和抗體均為生物活性物質，保存不當，極易失活。高濃度的結合物較為穩定，冰凍干燥后可在普通冰箱中保存一年左右，但凍干過程中引起活力的減低，而且使用時需經復溶，頗為不便。結合物溶液中加入等體積的甘油可在低溫冰箱或普通冰箱的冰格中較長時間保存。早期的ELISA試劑盒中的結合物一般均按以上兩種形式供應，配以稀釋液（見3.2.5）臨用時按標明的稀釋度稀釋成工作液。現在較先進的ELISA試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液，使用時不需再行稀釋，在4-8℃保存期...
2023
5-22

ELISA技術綜述（三）
以下簡述固相載體和包被過程。1.2包被的方式將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用力。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，...
2023
5-15

ELISA技術綜述（二）
ELISA的商品化試劑盒成分和分類：在臨床檢驗或者科研檢測中，ELISA實驗通常有商品試劑盒提供。ELISA試劑盒中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；（2）酶標記的抗原或抗體（結合物）；（3）酶的底物；（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）；（5）酶聯物（結合物）及標本的稀釋液；（6）洗滌液；（7）酶反應終止液。1、免疫吸附劑已包被抗原...
2023
5-8

ELISA技術綜述（一）
ELISA原理ELISA利用抗原抗體之間專一性結合之特性，對標本進行檢測；由于結合與固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設計其結合機制後，配合酵素顯色反應，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用顯色之深淺進行定量分析。根據待測樣品與結合機制的不同，ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式，主要以"三明治法"(sandwich)、"間接法"(indirect)、以及"競爭法"(Competitive)三種為主，以下為各種方法之介紹。ELISA分類見...
2023
5-4

ELISA試劑盒中的抗體
在ELISA試劑盒中運用的抗體可分為多克隆抗體（多抗）和單克隆抗體（單抗）。多抗取白免疫動物的抗血清，制備較簡略，但抗血清成分凌亂，除含針對抗原（多個表位）的抗體外，還含有多種其他抗體，親和力和特異性相對要低于單抗，且制備周期長，批間差異較大。而單抗僅針對抗體的單一表位，ELISA試劑盒親和力和特異性均較多抗高，且制備技能老練，產量大，批間差異小，但結合位點的單一也正是其缺陷之地址，在雙抗體夾心法中，如包被和指示抗體運用同一單抗，則由于結合位點的短少，簡略構成假陰．性成果。在...
2023
4-24

植物微囊藻毒素LR(MC-LR)elisa試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T1.2pg/mL-40pg/mL使用目的：本試劑盒用于測定植物組織，細胞及其它相關樣本中微囊藻毒素LR(MC-LR)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物微囊藻毒素LR(MC-LR)水平。用純化的植物微囊藻毒素LR(MC-LR)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物微囊藻毒素LR(MC-LR)，再與HRP標記的微囊藻毒素LR(MC-LR)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過che底洗滌后加底物...
2023
4-19

ELISA中分析非特異性顯色
酶聯免疫吸附試驗(ELISA)自1971年自問世以來，以其敏感性高，特異性強，操作簡便、安全，而廣泛應用于臨床診斷，開創了免疫學診斷的新紀元。但同其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、生產及使用中常常會碰到非特異性問題。1、試劑盒特異性因素1、1固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種，以微量滴定板最為常見[1]。它具有良好的吸附性能，孔底透明度高，空白值低，各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別...

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